Sanger-sekvensering: fra ddNTP til kromatogram

Følg hvordan manglende 3′-OH i ddNTP gir kjedeterminering og hvordan fragmentrekkefølge blir til et sekvenssignal.

Slik leser du visualet

Start med dNTP versus ddNTP, følg de terminerte fragmentene inn i størrelsesseparasjonen og les signalrekkefølgen til slutt.

Faglig gjennomgang

1. Et ddNTP mangler 3′-OH og kan derfor ikke danne neste fosfodiesterbinding i den voksende DNA-kjeden.
2. En blanding av terminerte fragmenter med ulike lengder oppstår når merkede ddNTP-er bygges inn på forskjellige posisjoner.
3. Instrumentet registrerer ordnede signaler; basesekvensen rekonstrueres fra signalidentitet og fragmentrekkefølge.

Nøkkelbegreper

Sanger-sekvensering · ddNTP · 3′-OH · kjedeterminering · kromatogram

Bruk på prøve og eksamen

Forklar både hvorfor kjeden stopper og hvordan det målte signalet oversettes til sekvens.

Relatert fagstoff

• Tilbake til Visual-kapittelet
• Biologi 2 fagforside
• Genteknologi og bioteknologi — fagtekst
• Bioteknologiske metoder — læringslab
• NGS: millioner av reads blir til variantkandidater
• Gendiagnostikk: hvilket spørsmål prøver testen å svare på?