Mikrobiologi: bakteriedyrking i Biologi 2

FramgangsmåteTeoriSensorspørsmålBegreper

I dette forsøket dyrker du bakterier på næringsagar og undersøker dem med gramfarging. Du lærer sterilteknikk, hvordan en synlig koloni oppstår fra én celle, og forskjellen på gram-positive og gram-negative bakterier – grunnleggende mikrobiologi for Biologi 2.

Hensikt

Dyrke bakterier på agar med sterilteknikk, observere kolonier, og skille gram-positive fra gram-negative bakterier med gramfarging.

Hypotese

Bakterier fra en prøve vil vokse til synlige kolonier på agar etter inkubering. Gramfarging vil dele bakteriene i to grupper etter celleveggens oppbygning.

HMS og sikkerhet

Før du starter

• Behandl alle kulturer som mulig smittsomme – bruk hansker og vask hender.
• Ikke åpne ferdig inkuberte skåler unødvendig; tape dem igjen.
• Kast kulturer som biologisk avfall (autoklavering/desinfeksjon).

Utstyr du trenger

• Agarskåler (næringsagar)
• Podenål / vattpinne
• Bunsenbrenner (sterilteknikk)
• Prøve (f.eks. fra overflate, hud eller yoghurt)
• Mikroskop
• Gramfargingssett (krystallfiolett, jod, sprit, safranin)
• Objektglass

Framgangsmåte – steg for steg

Framgangsmåte: stryk ut, inkuber, og gramfarge en koloni.

1. Arbeid sterilt: jobb nær flammen og bruk rene redskaper.
2. Stryk prøven ut på agaren med pode-/vattpinne i et tynt mønster.
3. Tape skålen igjen, merk den, og inkuber opp-ned ved passende temperatur.
4. Etter 1–2 dager: observer koloniene (form, farge, antall).
5. Lag et utstryk av en koloni på objektglass og varmefiksér.
6. Gjør gramfarging (krystallfiolett → jod → avfarg med sprit → safranin).
7. Mikroskoper og noter om bakteriene er fiolette (gram-positive) eller røde (gram-negative).

Observasjoner og resultater

Etter inkubering ser du synlige kolonier – hver er en haug av millioner bakterier som stammer fra én enkelt celle. Ved gramfarging blir gram-positive bakterier fiolette (tykk cellevegg holder på fargen), mens gram-negative blir røde/rosa (tynn vegg slipper fargen ut og tar opp safranin). Koloniene kan ha ulik form og farge avhengig av bakterieart.

Teorien bak

Tykk vegg (gram-positiv) vs. tynn vegg (gram-negativ).

En koloni er en synlig samling bakterier som har delt seg fra én opprinnelig celle. Bakterier formerer seg ved todeling og kan doble seg på minutter under gode forhold. Sterilteknikk hindrer forurensning fra lufta, så vi vet at det vi dyrker, kommer fra prøven.

Gramfarging skiller bakterier etter celleveggen: gram-positive har en tykk peptidoglykan-vegg som holder på den fiolette fargen; gram-negative har en tynn vegg pluss en ytre membran, slipper den fiolette fargen ut ved avfarging og tar i stedet opp den røde safraninen. Dette skillet er viktig fordi det bl.a. påvirker hvilke antibiotika som virker.

Typiske problemstillinger sensor stiller

Hva er en bakteriekoloni?

En synlig samling av millioner bakterier som alle stammer fra én opprinnelig celle som har delt seg gjentatte ganger.

Hvorfor bruker du sterilteknikk?

For å hindre at bakterier fra lufta forurenser prøven, slik at det vi dyrker faktisk kommer fra prøven vår.

Hva er forskjellen på gram-positive og gram-negative bakterier?

Gram-positive har en tykk peptidoglykan-vegg og blir fiolette. Gram-negative har en tynn vegg pluss en ytre membran og blir røde/rosa.

Hvorfor blir de ulike fargene i gramfargingen?

Den tykke veggen hos gram-positive holder på den fiolette fargen ved avfarging. Hos gram-negative vaskes den ut, og de tar i stedet opp den røde safraninen.

Hvordan formerer bakterier seg?

Ved todeling (binær fisjon): én celle deler seg i to. Under gode forhold kan de doble seg svært raskt.

Hvorfor inkuberer du skålen opp-ned?

For at kondens fra lokket ikke skal dryppe ned på agaren og smøre ut koloniene.

Hvorfor er gram-skillet viktig i medisin?

Fordi celleveggens oppbygning påvirker hvilke antibiotika som virker. Gram-positive og gram-negative bakterier behandles ofte ulikt.

Hvordan kaster du kulturene trygt?

Som biologisk avfall – autoklavert eller desinfisert, aldri rett i vanlig søppel, for å unngå spredning.

Sensortips – slik imponerer du

Slik får du toppkarakter

• Forklar at en koloni stammer fra én celle (todeling).
• Begrunn sterilteknikk og hvorfor skålen inkuberes opp-ned.
• Forklar gram-fargene ut fra celleveggens tykkelse.
• Koble gram-skillet til antibiotikabehandling.
• Nevn riktig avfallshåndtering (smittevern).

Slik vurderer sensor

Det som gir karakter 6

• Riktig forklaring av koloni og bakterievekst.
• Forståelse og begrunnelse av sterilteknikk.
• Korrekt forklaring av gramfarging og celleveggene.
• Kobling til antibiotika/smittevern.
• Vurdering av feilkilder og sikkerhet.

Typiske elevfeil å unngå

Vanlige feil

• Tror en koloni er én bakterie.
• Glemmer sterilteknikk og får forurensning.
• Bytter om gram-positiv (fiolett) og gram-negativ (rød).
• Åpner inkuberte skåler uforsiktig.
• Inkuberer skålen med lokket opp (kondens drypper).

Feilkilder

• Forurensning fra lufta uten god sterilteknikk.
• Ujevnt utstryk gir sammenflytende kolonier.
• Feil i gramfargingen (for lang/kort avfarging).
• Feil inkuberingstemperatur eller -tid.

Variasjoner av forsøket

• Sammenlign bakterier fra ulike overflater (telefon, hånd, dørhåndtak).
• Test effekten av såpe eller håndsprit på bakterievekst.
• Lag en antibiotika-følsomhetstest med små lapper på en bakterieplen.

Sentrale begreper

• Koloni – Synlig samling bakterier fra én opprinnelig celle.
• Sterilteknikk – Arbeidsmåte som hindrer forurensning.
• Gramfarging – Fargemetode som deler bakterier i gram-positive og -negative.
• Peptidoglykan – Stoffet i bakteriens cellevegg.
• Todeling – Bakteriers formering ved at én celle deler seg i to.
• Inkubering – Å la kulturen vokse ved passende temperatur.

Kompetansemål forsøket dekker

• Gjøre rede for mikroorganismers oppbygning, formering og betydning.
• Planlegge og gjennomføre mikrobiologiske forsøk med riktig sikkerhet og sterilteknikk.

Ofte stilte spørsmål

Hvor lang tid tar dyrkingen?

Som regel 1–2 dager i inkubator før koloniene er synlige. Selve arbeidet tar en time per dag.

Er det farlig å dyrke bakterier?

Behandl alle kulturer som mulig smittsomme: ikke åpne ferdige skåler, bruk hansker, og kast som biologisk avfall.

Hva om ingenting vokser?

Prøven kan ha hatt få bakterier, eller forholdene (temperatur, agar) passet ikke. Sjekk også at du ikke desinfiserte prøvestedet først.

Hvorfor varmefiksere før gramfarging?

For å feste bakteriene til glasset så de ikke vaskes bort under fargingen.

Hva må være med i labrapporten?

Hensikt, hypotese, utstyr, framgangsmåte, beskrivelse av kolonier, gramfargingsresultat, teori, feilkilder/sikkerhet og konklusjon.

Klar for muntlig-praktisk?

Øv på flere Biologi 2-forsøk og eksamensoppgaver med fasit.

Gå til Biologi 2

Relaterte sider

Anaerobe organismerGjæringEnzymkinetikkBiologi 2Alle Biologi 2-forsøkBiologi 1-forsøkEksamensoppgaver med fasit